Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2008 №1
![Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2008 №1](/uploads/covers/2023-12-07/internet-zhurnal-quotdomashnyaya-laboratoriyaquot-2008-1-201.jpg-205x.webp)
- Автор: Журнал «Домашняя лаборатория»
- Жанр: Газеты и журналы / Сделай сам / Хобби и ремесла: прочее
- Дата выхода: 2008
Читать книгу "Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2008 №1"
КОНСТРУИРОВАНИЕ КЛЕТОК
Протопласты широко используются также в качестве реципиентов для клеточных органелл. В 1973 году И. Потрикусс и Ф. Хоффман успешно трансплантировали изолированные ядра петуньи в протопласты табака. Каким образом можно ввести ядро или другие клеточные органеллы в протопласт?
При использовании сэндвич-метода трансплантацию проводят в условиях слабого деплазмолиза протопласта. Перед введением протопласты и ядра обрабатывают лизоцимом, который модифицирует клеточную мембрану. Далее осуществляют попеременное осаждение ядер и протопластов центрифугированием. В результате центрифугирования в пробирках формируется несколько чередующихся слоев. Центрифужные пробирки заполняют раствором осмотика (маннита) без лизоцима и центрифугируют полчаса при 140 д, оставляют на 2 часа при температуре +4 °C. Осадок ресуспендируют и просматривают под микроскопом. Ядра можно обнаружить и в цитоплазме, и в вакуолях. В некоторых случаях при поглощении ядра образуются жизнеспособные гибриды, в других — в клеточном цикле происходит потеря интеграции между чужеродным ядром и ядром хозяина.
Клеточные органеллы можно также переносить посредством липосом. Широкий спектр одно- и многоламелльных частиц, которые сливаются с мембранами протопластов, получен с применением таких веществ, как фосфатидилсерин, холистерол и т. д. Можно также переносить органеллы путем микроинъекций. Этот метод широко используется для введения в клетку ДНК, РНК, а недавно был успешно использован и для переноса клеточных органелл у растений.
Кроме ядра трансплантируют и другие органеллы, такие как митохондрии и хлоропласты. Выбор этих органелл объясняется их полуавтономностью, то есть наличием собственной ДНК и способность делиться самостоятельно, независимо от деления самой клетки. Кроме того, эти органеллы контролируют важнейшие физиологические процессы растительной клетки, такие как фотосинтез и дыхание. Например, перенос хлоропластов может использоваться для выведения новых форм хозяйственно важных сортов растений. Трансплантация высокоэффективных хлоропластов может способствовать активации фотосинтеза и повышению продуктивности растения.
Одним из важных моментов является сохранение клеточных органелл, поэтому для переноса их в последнее время используются субпротопласты — фрагменты, полученные из протопластов. Они могут содержать большую часть цитоплазмы, но без ядра (цитопласты), ядро с небольшим количеством цитоплазмы (кариопласты), часть хромосом с небольшим количеством цитоплазматического материала (микропротопласты).
Биологическое конструирование на уровне клетки может оказаться полезным и перспективным для создания клеток, клеточных систем и целых растений, удовлетворяющих потребности человека. Под биологическим конструированием следует понимать не только введение отдельных органелл (рис. 16). Аналогичным образом в клетку можно вводить и чужеродный генетический материал как в виде фрагментов ДНК, так и в виде отдельных хромосом. Кроме того, в изолированные протопласты можно вводить клетки микроорганизмов, создавая таким образом искусственные ассоциации.
Рис. 16. Конструирование клеток
(по Р.Г. Бутенко, 1987)